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百瑞極——免疫學(xué)三大實(shí)驗的區別

想檢測實(shí)驗樣本中的靶蛋白,但是ELISA、WB、IHC傻傻分不清,到底應該選擇哪種方法呢?又該如何開(kāi)展實(shí)驗呢?


本文幫大家總結整理了ELISA、WB、IHC的標準實(shí)驗流程,幫大家順利搞定實(shí)驗!


酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、蛋白免疫印跡(WB)、免疫組化(IHC),是免疫學(xué)三大常用工具,應用于目的蛋白的定量、定性和定位分析。

這三種免疫學(xué)檢測手段,都是基于抗原與抗體特異性結合的原理,其差異性在于:

◆ ELISA更適合定量檢測胞外的分泌性蛋白

◆ WB多用于胞膜、胞漿或胞核蛋白的半定量檢測

◆ IHC主要用于胞蛋白的定位


下面分為為大家介紹三大實(shí)驗


蛋白免疫印跡(WB)

WB(Western Blot,蛋白免疫印跡)利用靶蛋白分子量大小不同的原理,用SDS-PAGE(凝膠電泳)分離蛋白質(zhì),將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)用電轉儀轉移到固相載體(膜)上,然后利用抗原-抗體-標記物顯色來(lái)檢測目標蛋白含量。WB多用于胞膜、胞漿或胞核蛋白的定性和半定量檢測。

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免疫組化(IHC)

IHC(Immunohistochemistry,免疫組織化學(xué)技術(shù))融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等),通過(guò)化學(xué)反應,使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,來(lái)對組織(細胞)內抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,其主要對胞內蛋白進(jìn)行定位。

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酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)

ELISA運用了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應顯色原理,需要將抗原或抗體預包被在固相載體表面,使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶(熒光基團)-底物復合物黏附在載體上,通過(guò)檢測OD值或發(fā)光值,來(lái)檢測靶蛋白的含量。ELISA更適合定量檢測胞外的分泌性蛋白。

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